Тезисы Ежегодной конференции Ассоциации специалистов по проблемам меланомы «Меланома и опухоли кожи» (17–18 мая 2019 г., Москва)
 11 февр. 2020 г.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ

 

Вартанян А.А.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Вемурафениб индуцирует переход клеток меланомы в мезенхимально-подобные стволовые клетки

 

Введение. Наиболее часто при меланоме кожи выявляется мутация в онкогене BRAF, что приводит к конститутивной активации BRAF-киназы. Ингибиторы BRAF-киназы заметно улуч- шают общую выживаемость больных с метастатической меланомой, однако у половины из них через 6–8 месяцев приема препарата наступает резистентность.

Цель. Получить культуры клеток меланомы из опухолей больных, которые перестали от- вечать на вемурафениб, и исследовать механизмы, вовлеченные в становление этой рези- стентности.

Материалы и методы. В работе были использованы 2D-культивирование клеток, ИЦХ, RTPCA, проточная цитофлуориметрия, остеогенная и адипоцитная дифференцировка.

Результаты. Из образца опухоли пациента с мутацией BRAFV600E, устойчивой к вему- рафенибу, нами была получена клеточная линия Mel Ki. Клетки были гомогенными и имели фибробластоподобную форму. Статус меланомы подтверждали экспрессией CD63 и Melan A / MART-1. Иммунофенотипический анализ клеток Mel Ki показал, что более 99% клеток экспрес- сировали типичные маркеры мезенхимальной стволовой клетки (МСК): CD90, CD44 и CD105. Чтобы исключить контаминацию клеток меланомы Mel Ki МСК, нами из опухолевого материа- ла больной с мутацией BRAFV600E, устойчивой к вемурафенибу, была получена вторая клеточ- ная линия меланомы Mel F1702. FACS анализ подтвердил ту же тенденцию: более 90% клеток меланомы экспрессировали CD90 и CD44 и более 60% клеток экспрессировали CD105. Подобно МСК, эти клетки также не экспрессировали ни HLA-DR, ни маркеры гемопоэтических или эндотелиальных клеток, такие как CD45, CD31 и CD34. В обеих клеточных линиях мы наблюда- ли практически нулевую экспрессию 11 наиболее распространенных раково-тестикулярных генов (РТА). Такая картина характерна для стволовых клеток. Подтверждением плюрипотент- ности Mel Ki и Mel F1702 клеток оказалась способность клеток дифференцироваться в клетки мезодермальной линии – адипоциты и остеобласты.

Вывод. Полученные результаты указывают на то, что резистентность к вемурафенибу со- провождается приобретением клетками меланомы характеристик мезенхимальных стволо- вых клеток.

 


 

Мяснянкин М.Ю., Гельфонд М.Л., Анисимов В.В.
Лечебно-диагностический центр «Медика», Санкт-Петербург, Россия
Федеральное государственное бюджетное учреждение «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Морфологические характеристики и лечебный патоморфоз неоадъювантной фотодинамической терапии у больных меланомой кожи

 

Цель. Изучение и выявление лечебного патоморфоза неоадъювантной лазерной фотоди- намической терапии (неоФДТ) при использовании производных хлорина моно-L-аспартила е6 (радахлорин) в хирургическом лечением больных первичной меланомой кожи.

Материалы и методы. Проанализированы клинико-морфологические данные 15 боль- ных с морфологически подтвержденным диагнозом первичной меланомы кожи, получавших неоФДТ в сочетании с хирургическим лечением в клинике НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова в период с 2012 по 2013 г. В архиве патологоанатомической лаборатории НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова извлечены парафиновые блоки опухолей (n=13). С каждого парафинового блока были получены срезы толщиной 4 микрона, окрашены гематоксилином и эозином по стандартной методике. Проведено иммуногистохимическое исследование по стандартной методике с антителами меланомы кожи (SOX10), маркеров локального T-клеточного иммунно- го звена (Т-хелперов CD4, Т-киллеров CD8), апоптотической гибели (bcl2, p53), деструкции со- судов (CD31). Изучалась микроскопическая картина опухоли на наличие акантолиза и некро- за. Оценка иммунокомпетентных клеток в крови проводилась до лечения, через 7 дней после операции на проточном цитофлуориметре BD FACSCalibur (tm) (BD Biosciense) во 2-й группе, в первой с добавлением неоФДТ.

Результаты. При иммуногистохимическом исследовании все опухоли экспрессировали SOX10. В 31% (4/13) случаев меланомы кожи выявлены микроскопические признаки акантоли- за и некроза. В полях зрения наблюдали относительно многочисленные фигуры митоза и еди- ничные клетки, погибающие путем апоптоза. На срезах, иммуноокрашенных на CD31, отчетли- во определялась выраженная неоднородность распределения в перитуморальной области кровеносных сосудов, контуры их были расплывчатые, местами не определялись. Эндотелий сосудов давал неравномерное «пунктирное» иммуноокрашивание. Положительный результат окрашивания с антителами фактора апоптоза p53 выявлен в 23% (3/13) случаев. Положитель- ная экспрессия bcl2 определялась в 75% (9/12) случаев. Среднее содержание в перитумораль- ной области меланомы кожи субпопуляционного состав опухоль-инфильтрирующих лимфоцитов (TILs) CD4+ и CD8+, 357 и 423 соответственно. При анализе иммунного статуса в 1-й, в отличие от группы сравнения, выявлено статистически значимое повышение содержания иммунокомпетентных клеток: CD3+CD19– (р=0,019), CD3+CD8+ (р=0,026), CD3+CD4+HLADR+ (р=0,05), CD3-CD16+CD56+ (р=0,002), CD19+CD3– (р=0,021).

Выводы. 1. Фотодинамическое действие обусловлено разрушением сосудистого русла, быстрым ингибированием пролиферативной активности и девитализацией опухолевых кле- ток путем апоптоза и некроза, локальной иммуномодуляцией, способствует активации Т- и В-клеточного звена иммунной системы. 2. Анализ полученных результатов свидетельствует, что радахлорин обладает высокой фотодинамической активностью in vivo при неоФДТ мела- номы кожи.

 


 

РЕДКИЕ ОПУХОЛИ КОЖИ

 

Мяснянкин М.Ю., Емельянова М.А., Анисимов В.В.
Лечебно-диагностический центр «Медика», Санкт-Петербург, Россия
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии имени В.А. Энгельгардта Российской академии наук, Москва, Россия
Федеральное государственное бюджетное учреждение «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Молекулярное исследование и клинико-морфологические особенности подногтевой меланомы у больных в России

 

Цель. Выявление мутаций, клинических и морфологических особенностей подногтевой меланомы (ПМ), позволяющих оптимизировать диагностику, лечение и прогнозирование за- болевания.

Материалы и методы. В исследование включены данные патологоанатомического архи- ва НИИ онкологии имени Петрова (Санкт-Петербург) за период 1991–2017 гг. Выявлено 44 случая с диагнозом ПМ. Для исследования были рассмотрены только случаи с сохраненными клиническими данными (n=40). Выделение ДНК было успешным для 33 из этих 40 образцов. С помощью биологических микрочипов была установлена частота соматических мутаций в генах BRAF, NRAS, KIT, GNAQ и GNA11. Образцы с мутацией анализировали на наличие ампли- фикации измененного аллеля путем оценки отношения мутантного/нормального сигнала сек- венированием в электрофореграммах. Отдаленные результаты лечения изучены с помощью метода Kaplan – Meier. Сравнительный анализ отдаленных результатов лечения проведен с группой из 405 больных первичной меланомой кожи конечностей, а также с группой из 46 па- циентов с локализацией меланомы только на коже кистей, пальцев рук, стоп, пятке и пальцев ног. Для определения независимых факторов использованы методы однофакторного (Log- rank test) и многофакторного анализа с использованием регрессионной модели пропорцио- нальных интенсивностей Кокса (Cox).

Результаты. Наиболее важными клинико-морфологическими особенностями, характери- зующими ПМ, являются значительная длительность анамнеза, распространение на ногтевой валик (32,5%), локализация новообразования на пальцах нижних конечностей (75,5%), преи- мущественное поражение ногтевой фаланги больших пальцев (72,5%), преобладание акраль- но-лентигинозного типа (67,5%), IV уровень инвазии по Кларку (57,5%) и средняя толщина опухоли по Бреслоу 5,5 мм. Для персонализации лечения больных таргетными препаратами проводилось ИГХ антителом C-kit(CD117), которое имело место в 25,7% случаях. Образцы с му- тацией BRAF существенно не отличались от мутационных негативных опухолей по отношению к пролиферативному индексу Ki-67 или иммуногистохимическому признаку для экспрессии BRAF. Частота мутаций в гене NRAS достоверно не отличается, однако при ПМ выше доля сома- тических мутаций во 2-м экзоне, а при ЗМ – в 3-м экзоне (Р=0,04). Показатель 5-летней общей выживаемости после хирургического лечения больных ПМ составил 47% (безрецидивной вы- живаемости – 40%).

Выводы. Факторами прогноза заболевания являются возраст пациентов, уровень инва- зии по Кларку, изъязвление эпителия, поражение опухолью кости фаланги. У больных ПМ имеет место худший прогноз заболевания по сравнению с больными мела- номой кожи верхних и нижних конечностей (p=0,0001). По сравнению с меланомой других локализацией в целом при ПМ мутации в гене BRAF встречаются реже (Р<0,0001). Это исследование еще раз доказывает то, что значительная часть ПМ несет терапевтически значимую мутацию в онкогене BRAF.

 


 

ЭПИДЕМИОЛОГИЯ, ПРОФИЛАКТИКА, РАННЯЯ ДИАГНОСТИКА И СКРИНИНГ ОПУХОЛЕЙ КОЖИ

 

Мерабишвили В.М.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Достоверность учета и 5-летняя выживаемость больных меланомой кожи

 

Введение. При проведении любых исследовательских разработок мы в первую очередь должны убедиться в надежности отобранного для исследования материала. Среди пяти ос- новных критериев оценки деятельности онкологической службы, таких как заболеваемость, смертность, уровень морфологической верификации опухолей, важнейшее значение имеют показатели индекса достоверности учета (ИДУ) и расчет выживаемости больных ЗНО.

Цель. Определить уровень достоверности учета (ИДУ) больных меланомой кожи (С43) и ее динамику с 1995 по 2017 г. по России в целом и по ряду административных территорий. Вы- числить по отдельным территориям 5-летнюю наблюдаемую и относительную выживаемость.

Материалы и методы. Материалом для исследования являются статистические сборники, в том числе авторские, базы данных раковых регистров СЗФО РФ. Использованы стандартные методы статистического анализа.

Результаты. ИДУ больных злокачественной меланомой кожи относится к группе ЗНО с низким уровнем летальности (ИДУ<0,5). С 1995 по 2017 г. ее величина (оба пола) снизилась с 0,4 до 0,33. Вместе с тем необходимо обратить внимание, что среди мужского населения в 1995 г. его величина составляла 0,79, т. е. относилась к группе ЗНО с высоким уровнем летальности. В 2017 г. составляла 0,41. Эти же тенденции характерны для женского населения. ИДУ уменьшился с 0,47 до 0,29. Важно отметить, что по всем административным территориям, чьи БД ПРР были привлечены для расчета 5-летней наблюдаемой и относительной выживаемости, уровень показателей существенно ниже среднеевропейских (Eurocare-4).

Вывод. Выявлены существенные улучшения учета больных злокачественной меланомой кожи. Вместе с тем сохраняется относительно низкий уровень расчетных показателей 5-летней наблюдаемой и относительной выживаемости больных злокачественной меланомой.

 


 

Хвостовой В.В., Гокин А.Ю., Киселев И.Л., Силина Л.В.

Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия

Клинико-морфологические данные по результатам хирургического лечения меланомы кожи в Курской области за период 2008–2017 гг.

 

Введение. За последние 40 лет заболеваемость меланомой кожи (МК) в мире возросла примерно в 3 раза. В России в течение последних 15 лет отмечается рост заболеваемости на 70%. Однако заболеваемость МК неодинакова в различных регионах Российской Федерации, что создает необходимость более подробного изучения эпидемиологических данных по за- болеванию.

ЦельАнализ эпидемиологических данных по меланоме кожи в Курской области за период 2008–2017 гг.

Материалы и методы. Проведен ретроспективный анализ патологоанатомических за- ключений данных оперативного лечения 844 пациентов в возрасте от 5 до 95 лет, которым было выполнено удаление меланомы кожи на территории Курской области за период 2008– 2017 гг. Статистическая обработка полученных данных производилась с использованием про- граммы Statistica 8.0.

Результаты. Из 844 операций 547 (65%) выполнено женщинам, 297 (35%) – мужчинам, что соответствует данным большинства авторов, указывающих на практически двукратное преоб- ладание женщин в структуре общей заболеваемости. Опухоль встречается практически в лю- бом возрасте, но чаще в 40–70 лет. Средний возраст больных меланомой кожи за изучаемый период составил 61,8±15,79 года. При изучении патологоанатомических заключений больных, оперированных по поводу МК в Курской области, были получены следующие результаты: темп прироста заболеваемости варьировал от –20,79% до 23,64% со средним значением за 9 лет 5,15%, что соответствует общемировым показателям. Анализируя возрастно-половые по- казатели заболеваемости, отмечаются пики заболеваемости меланомой кожи: в возрастных интервалах 45–59 и 70–74 года. В детском и подростковом возрасте (от 0 до 19 лет) случаи за- болеваемости меланомой кожи единичны. В возрасте 80 лет и старше у обоих полов наблюда- ется значительное снижение заболеваемостью меланомой, что, вероятно, связано со средней продолжительностью жизни в России, составляющей 72,7 года. Проанализирована динамика уровня инвазии по Кларку, толщины пор Бреслоу, изъязвления поверхности опухоли.

Выводы. Большинство показателей соответствуют общероссийским: в структуре общей заболеваемости преобладают женщины; большинство пациентов попадают в возрастную группу 40–70 лет; за последние 10 лет отмечается рост заболеваемости МК, незначительно превышающий общероссийские показатели.

 


 

АДЪЮВАНТНОЕ И НЕОАДЪЮВАНТНОЕ ЛЕЧЕНИЕ МЕЛАНОМЫ КОЖИ

 

Зозуля А.Ю., Балдуева И.А., Новик А.В., Нехаева Т.Л., Данилова А.Б., Пипиа Н.П., Авдонкина Н.А., Гирдюк Д.В., Проценко С.А.
Федеральное государственное бюджетное учреждение «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Возможности адъювантной терапии аутологичной дендритно-клеточной вакциной на основе раково-тестикулярных антигенов CaTeVac у больных меланомой кожи

 

Цель. Оценить безрецидивную и общую выживаемость у пациентов с меланомой кожи на фоне адъювантной терапии аутологичной дендритно-клеточной вакциной CaTeVac и интер- фероном-альфа.

Материалы и методы. В данной работе представлено 127 пациентов с меланомой кожи II–IV стадии, которым выполнена радикальная резекция с последующим назначением адъю- вантной терапии в период с 2009 по 2016 г. После обсуждения с пациентами первая группа (n=64) выбрала стандартное лечение интерфероном-альфа, а вторая группа (n=63) выбра- ла экспериментальное лечение аутологичной дендритно-клеточной вакциной на основе раково-тестикулярных антигенов CaTeVac. В первой группе интерферон-альфа применялся в высоких дозах у 3 пациентов; в низких дозах (3–5 млн МЕ) – у 55 пациентов. Повышение дозы до достижения максимальной переносимой было выполнено у 6 пациентов. Лечение проводилось в течение 1 года. Характеристика пациентов: пол (мужской – 32%; женский – 68%); средний возраст – 49 лет (диапазон 23–77); наличие изъязвления (71,4%); поражение лимфоузлов (75%); стадия TNM UICC 8 (II ст. – 28%; III cт. – 68%; IV cт. – 4%). Во второй группе аутологичная дендритно-клеточная вакцина на основе раково-тестикулярных антигенов CaTeVac применялась внутрикожно в дозе 10–20*106 зрелых ДК за 1 введение у 63 пациентов. У всех пациентов этой группы с иммуномодулирующей целью был использован Циклофосфамид 300 мг внутривенно за 3 дня до иммунотерапии CaTeVac. Запланированный период лечения составлял 1 год; допустимое продолжение – в поддерживающем режиме до 3 лет. Характеристика пациентов: пол мужской – 47,9%, женский – 52,1%; средний воз- раст – 53 года (диапазон 16–85); наличие изъязвления (59,4%); поражение лимфоузлов (93%); стадия TNM UICC 8 (III cт. – 79,2%; IV cт. – 20,8%).

Результаты. Относительный риск прогрессирования в течение 5 лет на 20% выше в груп- пе пациентов с интерфероном-альфа относительно группы пациентов с CaTeVac (1,196, 95% ДИ 1,033–1,383). За пятилетний период не получено достоверных различий в общей выжи- ваемости в обеих группах (p=0,3), но следует отметить, что в группе CaTeVac превалировали пациенты с III и IV стадией, что априори ассоциировано с более худшим прогнозом.

Вывод. Аутологичная дендритно-клеточная вакцина собственного производства на ос- нове раково-тестикулярных антигенов CaTeVac является перспективным методом лечения больных меланомой кожи в адъювантном режиме (относительный риск прогрессирования в течение 5 лет на 20% выше в группе пациентов с интерфероном-альфа по сравнению с груп- пой пациентов CaTeVac (1,196, 95% ДИ 1,033–1,383)).

 


 

УПРАВЛЕНИЕ НЕЖЕЛАТЕЛЬНЫМИ РЕАКЦИЯМИ ИММУНОТЕРАПИИ И ТАРГЕТНОЙ ТЕРАПИИ

 

Новик А.В., Анохина Е.М., Шулятьева А.А., Семенова А.И., Проценко С.А., Балдуева И.А. Федеральное государственное бюджетное учреждение «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение ВО «СПбГПМУ» Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия

Роль патогенетической классификации иммуноопосредованных нежелательных явлений (иНЯ) у больных меланомой кожи, получавших терапию ипилимумабом

 

Цель. Изучение частоты выявления и значения различных по патогенезу иНЯ у больных диссеминированной меланомой кожи, получавших терапию ипилимумабом.

Материалы и методы. В исследование включено 99 пациентов с меланомой III неопе- рабельной или IV стадии, получавшие терапию ипилимумабом в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России с 2012 по 2016 г. В исследуемой группе пациентов было зарегистрировано 388 случаев иНЯ. Все иНЯ были сгруппированы в соответствии с предло- женной авторской классификацией. Дополнительно были введены иНЯ с неопределенным механизмом и отдельные симптомы, возможно, ассоциированные с иНЯ.

Результаты. ИНЯ, связанные с главным комплексом гистосовместимости (ГКС) II класса, составили 42,8%, опосредованные врожденной иммунной системой – 16%, ассоциированные с IgE-зависимой гиперчувствительностью – 8,5%, с ГКС I класса – 5,4% и с молекулярной ми- микрией – 0,5% от 388 выявленных иНЯ. В 13,9% случаев патогенез иНЯ не был установлен. Симптомы, возможно, ассоциированные с иНЯ, наблюдались в 12,9% случаев. Исследованные нами прогностические факторы (уровень ЛДГ и мутация в гене BRAF) не влияли на частоту возникновения иНЯ (p>0,05). При оценке общей выживаемости (ОВ) установлено, что при вы- явлении иНЯ, обусловленных ГКС II класса, медиана ОВ составила 433 дня против 174 дней при их отсутствии (р=0,0008). Отсутствие этого типа иНЯ в 2,397 раза увеличивало риск смерти и являлось независимым от ЛДГ прогностическим фактором (р=0,004). Больные с иНЯ, обу- словленными вовлечением адоптивной иммунной системы (ИС), имели тенденцию к лучшим показателям выживаемости (р=0,042), тогда как с иНЯ, обусловленными врожденной ИС, – тен- денцию к худшим результатам (р=0,311).

Вывод. Частота возникновения иНЯ не зависит (р>0,05) от известных прогностических факторов (наличие мутации BRAF, уровень ЛДГ). Только отдельные виды иНЯ являются неза- висимыми предиктивными факторами при оценке ОВ, что делает обоснованным дальнейшую разработку патогенетических подходов к их изучению.